Продолжительность электрофоретического разделения

Продолжительность электрофоретического разделения

Гелевый буфер: 3,32 г этилбарбитала, 21,02 г натрия барбитала и 3,07 г кальция ацетата разбавить дистиллированной водой до 2000 мл. Приготовление 1 —1,5% агарового геля: агар высокой степени очистки (например, специальный агар Noble фирмы Difco) или же Кобе-агар I, несколько раз промытый в дистиллированной воде Schlesinger, Vogt, Prokop, 1963 растворяют в разведенном (в соотношении 1:1) гелевом буфере посредством нагревания на водяной бане и разливают на специальные стеклянные пластины размером 13×18 см. На приготовление одной пластины требуется около 50 мл расплавленного агара. После застывания геля в нем проделывают стартовые отверстия (лупки) для внесения антигена и заполняют их испытуемыми сыворотками крови Иммуноэлектрофорез проводят при градиенте напряжения 7—8 В/см. Продолжительность электрофоретического разделения от 2 до 2,5 ч. Непосредственно после окончания электрофореза агаровую пластинку вынимают из прибора и в предварительно вырезанные в агаре бороздки, располагающиеся вдоль направления электрофоретического разделения сывороточных белков, вводят преципитирующую сыворотку анти-Gc. Непосредственно после окончания электрофореза агаровую пластинку вынимают из прибора и в предварительно вырезанные в агаре бороздки, располагающиеся вдоль направления электрофоретического разделения сывороточных белков, вводят преципитирующую сыворотку анти-Gc. Для проведения преципитации пластины оставляют во влажной камере на 20 ч при температуре 37 °С. В течение этого времени антисыворотка анти-Gc диффундирует в геле агара и образует преципитаты в виде дуг с электрофоретичеоки разделенными протеинами ис-? -следуемой сыворотки крови. После образования преципитатов пластинки с агаровым гелем промывают для удаления избытка преципитирующей сыворотки анти-Gc изотоническим раствором хлорида натрия и дистиллированной водой, а потом преципитаты осажденных белков окрашивают раствором амидо черного 10 В.

Оставить комментарий

Почта (не публикуется) Обязательные поля помечены *

Вы можете использовать эти HTML теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите самый большой кружок: