Выявление ферментативной активности того или иного фермента

Выявление ферментативной активности того или иного фермента

Выявление ферментативной активности того или иного фермента проводится с помощью реакций азосочетания с использованием специфичного субстрата и определенных красящих веществ. Помимо цветных реакций, для выявления ферментативной активности используется облучение гелей ультрафиолетовыми лучами, в результате которого в местах расположения электрофоретически разделенных изоферментов наблюдается либо флюоресценция, либо дефлюоресценция. Приготовление гемолизатов Из свежих образцов крови готовят эритроцитарную взвесь на изотоническом растворе хлорида натрия, содержащего 0,1% меркаптоэтанола. Эритроциты 2—3 раза промывают в этом растворе, центрифугируют и осадок эритроцитов (седимент) подвергают гемолизу посредством!

194 глубокой заморозки (при — 20 °С до — 30 °С в течение нескольких часов, луч ше в течение ночи) и оттаивания. При необходимости быстрого получения гемолизата эритроциты несколько раз глубоко замораживают в течение 15 мин и оттаивают. При необходимости быстрого получения гемолизата эритроциты несколько раз глубоко замораживают в течение 15 мин и оттаивают. После окончательного оттаивания на каждый миллилитр осадка добавляют 2—3 капли глицерина и гемолизат сохраняют в замороженном состоянии.

Для получения гемолизата без стромы к нему добавляют четыреххлористый углерод, пробирки энергично встряхивают и центрифугируют. Для исследования используют прозрачный лаковый супернатант, не содержащий эритроцитарной стромы. W Martin (1982) рекомендует приготавливать гемолизаты эритроцитов с помощью ультразвука и толуола.

Осадок отмытых эритроцитов обрабатывают ультразвуком, потом в пробирку добавляют толуол, содержимое пробирки встряхивают, снова обрабатывают ультразвуком и снова . встряхивают и в заключение центрифугируют.

Оставить комментарий

Почта (не публикуется) Обязательные поля помечены *

Вы можете использовать эти HTML теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите самый большой кружок: